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反相液相色谱柱操作步骤

点击次数:299     发布时间:2022-08-16
反相液相色谱柱操作步骤
1.使用新鲜洁净的水与乙腈。冲洗系统,确保系统干净,不含任何缓冲盐和污染物。
2.取用色谱柱时避免磕碰掉落。
3.将反相液相色谱柱入口端连接到系统上,柱出口端先不要连接,色谱柱身上有箭头标明正确流向。
4.在0.1 mL/min流速条件下用反相液相色谱柱,然后在2分钟内将流速升至0.5 mL/min。
5.当溶剂均匀的从柱出口端流出,停流速,将反相液相色谱柱出口端接到系统检测器上(这样可以避免气泡进入检测系统,并且可快速达到基线平衡)。
6.重启流速,按照步骤4的方法逐渐提高流速,至常规分析时所使用的流速。
7.参考柱效测试报告中的方法,使用该流动相条件平衡反相液相色谱柱,通常需要使用5-10倍柱体积的流动相,直至压力与基线稳定。
8.测试柱效。如果没有柱效测试报告中的分析物,请沃特世化学消耗品部门寻求支持,使用合适的浓度与进样量。柱效结果略低于柱效测试报告属正常情况。如结果明显偏低、峰形拖尾,提示色谱柱和/或所使用的液相系统处于非理想状态,需要进行故障排查。


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