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反相液相色谱柱使用注意事项

点击次数:262     发布时间:2022-08-16
反相液相色谱柱过程中注意事项
1、新c18反相液相色谱柱在使用前,须先用甲醇或乙腈试剂以20倍柱体积低流速冲洗,作用是使固定相能充分润湿、碳链舒展彻底,使色谱柱的性能达到状态。具体操作是,将配制好65%的乙腈/水冲洗后,把色谱柱进口端连接在色谱仪上,出口端放空(不可连上检测器,以免污染了检测器),以0.1ml/min~0.5ml/min的低流速将色谱柱中的清稀溶液吹干,过20分钟后再接上检测器,以1.0ml/min的流速,继续冲洗2~8小时;
2、反相液相色谱柱检测分析样品完毕后,须冲洗色谱柱。尤其是流动相中含有酸或盐时,需将色谱柱中的酸或盐冲洗干净,通常建议用10%甲醇水冲洗20倍柱体积;
3、若c18反相液相色谱柱处于长期闲置状态时,要将色谱柱彻底冲洗,建议冲洗3-4小时以上,zui后保存在纯有机试剂或高比例的有机试剂溶液(如90%甲醇水)中;
4、由于反相液相色谱柱的固定相疏水性较强,在使用过程中尽量不要使用高水相条件,若水相比例过高易引起固定相疏水塌陷,引起柱效迅速下降,甚至造成不可逆的负面影响;由于碳载量高,表现尤为明显,建议使用过程中水相比例不超过90%;
5、c18反相液相色谱柱压力升高、柱性能下降:通常为色谱柱被污染,对色谱柱进行再生处理可恢复部分柱效;  
6、反相液相色谱柱压力骤升:通常由盐析出或筛板堵塞引起,若是盐析出,用10%甲醇水低流速冲洗至压力恢复即可;若判断并非盐析出,以纯甲醇或10%甲醇水为流动相反冲色谱柱(将色谱柱反接,不接检测器),若反冲半小时仍无效果则说明反冲无效,需寻找其他原因。


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